重组DNase I，无RNase

3.1.21.1 ( BRENDA | IUBMB )

重组DNase I是一种DNA特异性内切酶。该酶可通过水解连接到DNA上的磷酸二酯而催化双链及单链DNA的随机降解，形成寡核苷酸和单核苷酸的混合物。重组DNase I的生产过程中所使用的所有材料都无动物来源，因而可形成无动物源产物。

内容物

• 重组DNasae I，不无RNase，10 U/μl
• 孵育缓冲液，10x浓度

热灭活：一单位无RNase重组DNase I可在75 ℃孵育10分钟进行热灭活。

重要提示：无RNase重组DNase I也可根据标准实验方案通过酚提取进行灭活并去除，如分子生物学中的现有实验方案。

在对RNase较为敏感的应用中，可采用无RNase的重组DNase I降解DNA。例如，DNase I常用于：

• 在RT-PCR之前去除RNA中的基因组DNA
• 在体外转录反应之后分离不含DNA的RNA
• 进行缺口翻译
• 在真核DNA中定位DNase敏感的区域

杜绝污染：每批次都按照现有质检工艺检测以确保无RNase及蛋白酶。

糖基化形式
重组DNase I异质性N端糖基化，因此会在电泳时呈现两条带。
二价离子要求
DNase I需要二价阳离子以实现最高活性。DNA特异性内切酶通过镁离子等离子激活，并由钙离子刺激。因此，酶会受到EDTA等金属螯合剂抑制。

一单位指的在1ml的检测条件下可造成260 nm处吸光值提高0.001/min的酶活性。
反应条件：
根据以下检测混合物测定体积活性。将100 μg小牛胸腺DNA与40至70单位的无RNase重组DNase I在1x孵育缓冲液中+ 25℃下孵育。测定260nm处吸光度增量。

激活剂：二价金属离子
工作溶液：储备溶液：20 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，2 mM CaCl₂，2 mM MgCl₂，1mM二硫赤藓糖醇，0.1 mg/ml Pefabloc SC，50% 甘油(v/v)，pH 7.6 (4 ℃)。
孵育缓冲液(10x)：400 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，60 mM MgCl_2^， 10 mM CaCl₂，pH 7.9。
酶稀释液：25 mM Tris-HCl，50%甘油(v/v)，pH 7.6 (4 ℃)。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

100

bovine pancreas

expressed in Pichia pastoris

solution

~39 kDa

Roche

7.0-8.0

dry ice

1个试剂盒包含2种组分

将未稀释的酶溶液-15至-25℃储存；缓冲液4℃储存。

12 - Non Combustible Liquids

WGK 1