PCR DIG 探针合成试剂盒

sufficient for 25 reaction (50 μL final reaction volume)

100

Roche

Designing Safer Chemicals
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Aligned

dry ice

−20℃

1个试剂盒包含6种组分。

PCR DIG探针合成试剂盒包含碱不稳定性洋地黄毒苷 (DIG)-11脱氧尿苷三磷酸(dUTP)制剂。该试剂盒可方便有效地制备聚合酶链式反应(PCR)所需的高灵敏度DIG标记DNA探针。这一探针可通过PCR方法利用DIG-11dUTP(碱不稳定性)标记。DIG-dUTP:dTTP的比例为1:2。
PCR DIG探针合成试剂盒包含增强高保真DNA聚合酶混合物。这种强大的酶混合物具有校对活性，以10 pg质粒DNA和10 ng基因组DNA为模板，可聚合40 bp至5 kb长的探针。DIG标记探针可稳定储存一年以上。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品为一种安全的化学品。  DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代核酸放射性标记和检测。有许多已发表论文证明了DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交的DNA的唯一选择。

利用PCR DIG探针合成试剂盒制备的洋地黄毒苷(DIG)标记DNA探针适于检测Southern和Northern杂交中的低(单)拷贝基因mRNA。DIG标记DNA探针也已用于原位杂交过程中的DNA标记。
可根据探针长度调节提供的dUTP-核苷酸混合物浓度。可在琼脂糖凝胶上快速确定标记效果。
可按照包装说明书中的方案，多次抗体剥离和重新检测。
一次PCR标记反应 (50 μl)制备的探针，通常足够用于20 ml杂交溶液。本试剂盒可进行约25次反应(50 μl)。

每个批次的PCR DIG探针合成试剂盒都在PCR中经过功能呢检测。扩增产品在基因组Southern blot中进行了检测。
在如本包装内插页所描述的PCR条件下，对照反应可生成442bp的扩增产物。由于在PCR过程中DIG-dUTP的多次插入，PCR产物的分子量将会相对于未标记PCR产物略有提高。在将PCR产物杂交至10μg人类基因组DNA后可通过后续的化学发光检测检测到特异性的片段模式。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。
样品材料
任何适合作为PCR模板的DNA都可被标记。可使用：

• 质粒DNA, 10至100pg (最佳量 10pg)
• 基因组DNA, 1至50ng (最佳量, 10ng)

PCR中模板浓度是生成特异性探针的最为重要因素。对于绝大多数模板，请勿使用超过上述的给定量。过多的模板将会导致初级延伸产物的共扩增(那些复制超过了结合位点的)。这些初级延伸产品可能会含有重复序列或来自二级结合位点(如果从基因组DNA制备)或载体序列(如果从质粒DNA制备)的不相关产物。在后续的杂交检测中，探针-靶标的杂合物将会因为探针会与载体或基因组DNA序列交叉杂交而形成拖尾。
为了获得更好的结果，可使用克隆的插入片段作为模板。基因组DNA可能会更难以使用。
模板的纯化对于PCR标记并没有其他类型标记那么重要。
一次反应可生成用于分析650cm²印迹膜的足够标记探针。

组份不可单独销售
Enzyme Mix, Expand High Fidelity 3.5 U/μl
PCR DIG Probe Synthesis Mix, containing dATP, dCTP, dGTP (2 mM each) 10x concentrated
PCR Buffer with MgCl₂ 10x concentrated
dNTP Stock Solution, containing dATP, dCTP, dGTP, dTTP (2 mM each), pH 7.0 10x concentrated
Control Template, plasmid DNA in Tris/EDTA buffer, pH 8.0. The 5-kb plasmid contains the cDNA for the human tissue-type plasminogen activator (tPA) 20 pg/μl
Control PCR Primer Mix, containing 50 pmol of each primer, control PCR primer 1 and 2 2 mM each

H412

P273 - P501

Aquatic Chronic 3

12 - Non Combustible Liquids

WGK 2