胶原酶 来源于溶组织梭菌

3.4.24.3 ( BRENDA | IUBMB )

232-582-9

MFCD00130830

胶原酶已用于动脉组织的制备，用于晚期糖基化终产物 (AGE) 的研究。这种酶还与其他蛋白酶一起用于人类肿瘤、小鼠肾、人脑、肺上皮和许多其他组织的解聚。也用于肝脏和肾脏灌注研究、胰腺的消化和非实质肝细胞的分离。检测浓度约为 1 mg/mL(每只大鼠肝脏总体积为 100 mL)时该酶对肝细胞的释放。

从组织中有效释放细胞需要胶原酶和中性蛋白酶的作用。每摩尔酶用 4 克原子钙 (Ca ^{2 +} ) 激活胶原酶。培养滤液被认为含有至少 7 种不同的蛋白酶，分子量范围为 68-130 kDa。最佳 pH 值为 6.3-8.8。这种酶通常用于消化组织样本中的连接成分，以释放单个细胞。胶原酶处理可使部分细胞死亡。通常使用 0.1 至 5 mg/mL 的浓度进行消化。反应的持续时间从 15 分钟到数小时不等，可产生令人满意的细胞解离，且不会引起太多的细胞死亡。首选含钙和 BSA 的 Krebs Ringer 缓冲液，活性需要 Zn ^{2 +} 。
每摩尔胶原蛋白酶被4g原子钙活化。 它被乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N，NN′,N′-四乙酸，β-巯基乙醇、谷胱甘肽、巯基乙酸和8-羟基喹啉抑制。

供应时，本品在-20℃ 下可稳定保存一年。在 37℃、50℃ 和-20℃ 条件下储存 30 天，FALGPA 或蛋白酶活性没有损失。如果快速冷冻 (10 mg/mL) 并在-20℃ 下冷冻，粗胶原酶溶液是稳定的。进一步冻融循环将破坏溶液。置于冰上 7 小时后，产品仍保持 100% 活性。

一个胶原蛋白消化单元(CDU)从牛跟腱胶原蛋白中释放的肽链量和1.0 μ亮氨酸，5小时，pH7.4,37℃，在钙离子存在下的茚三酮颜色相同。一个 FALGPA水解单元每分钟，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一个中性蛋白酶单元水解酪蛋白，产生颜色和1.0 μmole 酪氨酸每5小时，pH7.5,37℃下产生的相同。一个梭菌蛋白酶单元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分钟水解1.0 μmole BAEE。

溶液通常在 37℃ 下用 TESCA 缓冲液(含 50 mM TES，0.36 mM 氯化钙，pH 7.4)制备，浓度为 1-2 mg/mL。

200

non-sterile; 0.2 μm filtered

lyophilized powder

≥125 CDU/mg solid
0.5-5.0 FALGPA units/mg solid

68-130 kDa

−20℃

GHS08

Danger

H334

P261 - P284 - P501

Resp. Sens. 1

11 - Combustible Solids

WGK 1

dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves