CMV-CAS9-2A-GFP 质粒

NA.51

Cas9表达质粒使用CMV启动子，以实现Cas9的强瞬时表达。可以使用MluI和NheI替换CMV来进行启动子替换。此外，Cas9表达质粒可以使用XbaI进行线性化，从而用于基于T7的mRNA生成。添加与Cas9核酸酶平移共表达的荧光团可以容易地实现成功转染的可视化。

CMV-CAS9-2A-GFP 质粒已被用于诱导人类U937白血病细胞中的额外性梳样1( sex combs-like1 )突变。它也已用于CRISPR/Cas9分析。
CMV-CAS9-2A-GFP质粒适用于以下功能基因组学/靶点验证：

• 在多种细胞系中创建基因敲除
• 完全敲除不适合RNAi的基因
• 通过整合到内源基因中的启动子、融合标签或报告基因创造基因敲入细胞系

1管含1μg 的Cas9-2A-GFP质粒。

请注意，该产品不含向导RNA序列。向导RNA必须通过定制CRISPR产品选项卡单独购买。

CRISPR/Cas被细菌和古细菌用作防御入侵病毒和质粒的防御系统。最近，来源于化脓性链球菌 的II型CRISPR/Cas系统已被设计为在真核系统中起作用，其使用两种分子组分：单一Cas9蛋白和非编码向导RNA(gRNA)。可以通过单个gRNA对Cas9内切核酸酶进行编程，从而将DNA双链断裂(DSB)导向所需的基因组位置。与由锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB类似，细胞随后激活内源DNA修复过程[非同源末端连接(NHEJ)或同源定向修复(HDR)]，以愈合目标DSB。

为了介导DNA双链断裂，必须与U6-gRNA质粒一起使用。

文献中使用的标准转染浓度范围为≥1.0 ug/μl且≤5 uL的Cas9质粒结合≥1.0 ug/μl且≤5 ul的U6-gRNA质粒。(上述所有浓度均假设是对0.5~1百万个细胞进行核转染)。

CRISPR使用许可协议

200

expressed in E. coli

vial of 50 μL

20 ng/μL in TE buffer; DNA (1μg of plasmid DNA)

Promoter name: CMV

GFP

kanamycin

dry ice

−20℃

12 - Non Combustible Liquids

nwg