SP6/T7转录试剂盒

100

sufficient for 2 x 20 assays (stadard transcription)

Roche

DNA sequencing: suitable
hybridization: suitable

dry ice

−20℃

1个试剂盒包含12种组分。

样品材料
DNA插入转录载体pSPT18或pSPT19中。模板DNA必须在转录反应前用合适的限制酶进行线性化，以获得具有确定长度的转录物。使用完整的质粒DNA作为转录模板将会产生具有多个质粒长度的异质转录物。

热灭活：通过加入2μl 0.2MEDTA(pH8.0)和/或加热至65℃ 10分钟来终止反应。

通过SP6和T7聚合酶的 体外转录，对RNA进行放射性或非放射性标记的便捷试剂盒。该试剂盒也可用于“冷”转录检测。通过体外转录方法产生已知长度的单链RNA探针，其可用于多种杂交技术。
用于对克隆于SP6或T7启动子下游的DNA序列进行体外转录。可以使用放射性(例如，³²P、³H、³⁵S)标记的或非放射性的(例如，洋地黄毒苷或生物素)标记的核糖核苷酸以高效率(60-70％掺入)合成均一标记的RNA。标记的转录本适用于所有DNA和RNA杂交技术，也可用于基因组测序和S1核酸酶研究。使用SP6/T7系统可以合成大量高纯度的RNA。这些转录本可用于RNA加工系统的研究。合成的RNA可以在注射到卵母细胞后在体外或体内进行翻译。通过引入“反义”-RNA可以抑制确定的mRNA的转录。通过引入帽结构可以显著增加合成mRNA的体内 翻译效率。

将DNA插入转录载体pSPT18或pSPT19的多接头位点；这两个载体的区别仅在于它们的多接头区域的方向。SP6和T7 RNA聚合酶的启动子位于多接头的任一侧。SP6和T7 RNA聚合酶可分别特异性地转录SP6或T7启动子下游的DNA序列。多接头区域内的克隆插入物可从任一启动子开始转录。第一条DNA链可以用SP6 RNA聚合酶进行转录，而另一条链可用T7 RNA聚合酶进行转录。还可以通过以相反方向将相同的DNA插入pSPT18和pSPT19，并仅用一种RNA聚合酶对第一条和相反的另一条链进行转录。SP6和T7 RNA聚合酶使用克隆的DNA作为模板，并在Mg2+和核糖核苷三磷酸存在下合成互补RNA。亚精胺可促进酶活性。当使用放射性(例如，32P，3H，35S)或非放射性(例如，地高辛或生物素)标记的核糖核苷酸三磷酸时，可获得特异性标记的转录物。

工作溶液：标准标记检测
ATP、GTP、UTP混合物
通过制备溶液4、溶液6和溶液7的1:1:1混合物来制备ATP、GTP、UTP混合物。

用地高辛-11-UTP进行转录分析
ATP、GTP、CTP混合物1
以1:1:1混合ATP(瓶4)、CTP(瓶5)和GTP(瓶6)。
UTP/DIG-11-UTP混合物
将地高辛-11-UTP (6 mM)与UTP(瓶7)1:1混合，并作为一份加入混合物1中。

“冷”转录
ATP、GTP、CTP、UTP混合物
通过将瓶4、5、6和7中的溶液以1:1:1:1的比例组合来制备该混合物。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

组份不可单独销售
pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
Control DNA, (pSPT18- and pSPT19-neo-DNA, cleaved with Eco RI) 0.5 mg/ml
ATP, in Tris buffer 10 mM
CTP, in Tris buffer 10 mM
GTP, in Tris buffer 10 mM
UTP, in Tris buffer 10 mM
Transcription Buffer 10x concentrated
DNase I, RNase free, in buffer with 50% glycerol
RNase Inhibitor, in buffer with 50% glycerol
SP6 RNA Polymerase, in buffer with 50% glycerol
T7 RNA Polymerase, in buffer with 50% glycerol

GHS07

Warning

H319

P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313

Eye Irrit. 2

12 - Non Combustible Liquids

WGK 2