蛋白酶K，重组，PCR级

3.4.23.1 ( BRENDA | IUBMB )

蛋白酶K是枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶。重组酶与最初从白色念球菌(Tritirachium album)中分离出来的天然蛋白酶相同。重组酶的规格与天然蛋白酶的规格相同。氨基酸序列(分子量)和分子结构相同。但是，重组酶比天然酶的纯度更高，因为它不含DNA，无明显的切割特异性。该酶对天然蛋白质非常有效，因此，可快速灭活内源核酸酶，如RNA酶和DNA酶。该酶还具有溶液形式。

• 抑制剂：该酶可被Pefabloc^® SC灭活。但是，它不会被金属离子、螯合剂(如EDTA)、巯基试剂或胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制剂灭活。
• 激活剂：变性剂(SDS和尿素)可刺激蛋白酶K的活性。
• 最适pH：蛋白酶K在较广的pH范围内(4-12.5)均有活性。当在pH 6.5-9.5条件下孵育时，该酶可在几个小时内保持全部活性。
• 体积活度：

约2.5 U/mg冻干品(chromozyme测定)
约30 U/mg冻干品(血红蛋白测定)

注：SDS可使蛋白酶K的活性增加七倍。

蛋白酶K是已知最活跃的内肽酶之一，并且未表现出明显的切割特异性。蛋白酶K切割蛋白质的方式如下所述：X-↓-Y，其中X =脂族、芳族或疏水氨基酸，Y = 任何氨基酸。当过量使用和长时间孵育时，该酶可将蛋白质材料分解成游离氨基酸。

蛋白酶K是已知最活跃的内肽酶之一。该PCR级蛋白酶K特别适用于分离核酸以用于扩增反应，以及：

• 该酶对天然蛋白质非常有效，因此，可用于在核酸分离过程中快速灭活内源核酸酶，如RNA酶和DNA酶。这种特性使蛋白酶K特别适用于从组织或细胞中分离天然RNA和DNA。
• 该酶通过激活细菌自溶因子而促进细胞裂解。
• 该酶通过修饰细胞表面的蛋白质和糖蛋白来分析膜结构。
• 由于该酶经过测试不含RNA酶和DNA酶，并且几乎不含DNA，因此，它特别适用于分离PCR和RT-PCR模板。
• 蛋白酶K也可在菌落转移准备过程中用于去除细胞碎片，以及用于处理组织切片以确保在原位杂交过程中实现有效的探针浸润。

蛋白酶K是一种丝氨酸蛋白酶，无明显的切割特异性。它能够切割氨基酸X和Y(X-↓-Y)之间的蛋白质，其中X =脂族、芳族或疏水氨基酸，Y = 任何氨基酸。该酶对天然蛋白质非常有效，因此，可快速灭活内源核酸酶，如RNA酶和DNA酶。

• 选择一种有效的模板制备工具。可灭活大多数物种的DNA酶和RNA酶。
• 注重一致的质量和性能。严格的质量测试确保了最佳的稳定性和高水平的批次间性能一致性。
• 适用于各种条件下的样品制备。这款强大的酶可在很广的pH范围内保持稳定，是各种应用的理想选择。
• 受益于无污染的酶。该酶经过测试，不含RNA酶和DNA酶，并且几乎不含DNA。它特别适用于PCR模板的分离。

注：当过量使用和长时间孵育时，该酶可将蛋白质分解成游离氨基酸。

内容物
冻干PCR级蛋白酶K还具有溶液形式。

根据当前的质量控制程序，该制剂不含RNA酶、DNA酶和DNA。

• 不含核酸酶：每一批次均在各种底物上经过测试，确保不含核酸内切酶、核酸外切酶、核糖核酸酶和开口活性。
• DNA含量：=10 pg/mg酶(由Threshold测定)
• 生物负载：＆lt; 125 cfu/g(由《欧洲药典》中最严格的测试确定，该测试能确定活的需氧菌、酵母和真菌的总数)

激活剂：加入变性剂(SDS和尿素)，可刺激蛋白酶K的活性。例如，与无SDS条件下的蛋白酶K活性相比，SDS可使蛋白酶K的活性提高7倍。
工作溶液：为获得最佳结果，使用双蒸水或Tris缓冲液溶解蛋白酶K(重组，PCR级)。蛋白酶K的最佳缓冲液取决于具体应用。应始终遵循参数部分中的pH和温度指南。一般来说，蛋白酶K在含有尿素、十二烷基硫酸钠(SDS)和胍盐等变性试剂的缓冲液中可保持稳定且活性非常高。
存储条件(工作溶液)：-15至-25 ℃

使用双蒸水复溶，至少可达到20 mg/ml

仅用于生命科学研究。不用于诊断操作。
冻干PCR级蛋白酶K也具有溶液形式。

Pefabloc is a registered trademark of Pentapharm

100

lyophilized

~2 units/mg protein (Approximately 2.0 U/mg lyophilizate (2.5 U/mg protein) when assayed with the Chromozym assay (equivalent to 24 U/mg lyophilizate [30 U/mg protein] with the hemoglobin assay).)

pkg of 100 mg (03115879001)
pkg of 25 mg (03115836001)
pkg of 2 × 250 mg (03115801001)
pkg of 4 × 250 mg (03115852001)

Roche

4.0 - 12.5

wet ice

2-8℃

GHS07,GHS08

Danger

H315 - H317 - H319 - H334 - H335

P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311

Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - Skin Sens. 1 - STOT SE 3

Respiratory system

11 - Combustible Solids

WGK 1