rAPid碱性磷酸酶

3.1.3.1 ( BRENDA | IUBMB )

rAPid碱性磷酸酶是从牛肠中分离的碱性磷酸酶，作为在毕赤酵母(Pichia Pastoris)中表达的56kD重组酶提供。重组形式确保了一致性和安全性。rAPid碱性磷酸酶能够催化DNA和RNA、核苷酸和蛋白质的5′磷酸盐的去磷酸化。碱性磷酸酶处理可去除连接酶所需的5′-磷酰基末端，从而防止DNA片段的自我连接；该特性能够减少载体背景，对于克隆策略非常重要。与小牛肠道磷酸酶不同，rAPid碱性磷酸酶在+75 ℃下热处理2分钟，可快速、完全且不可逆地灭活。因此，它是虾碱性磷酸酶的出色替代品。此外，该酶在限制酶缓冲液中具有活性。因此，无需纯化步骤，即可完成限制酶消化、去磷酸化、酶失活、连接或5′-末端标记。

碱性磷酸酶可以催化许多磷酸酯的水解，如伯醇和仲醇、糖、环醇、酚和胺的酯。与磷酸二酯不反应。该酶能水解无机焦磷酸盐。酶的动力学性质取决于许多因素，如酶的纯度、测定中酶的浓度、缓冲液、pH等。
热灭活：通过在75℃温育2分钟，可以灭活rAPid碱性磷酸酶。

• rAPid碱性磷酸酶可用于许多应用，包括：从核酸中去除5′-磷酰基
• 制备用于5′-末端标记的模板
• 去除dNTP，净化PCR产物
• 蛋白质的去磷酸化

注意：通过在75℃温育2分钟，可以非常快速地灭活rAPid碱性磷酸酶。在限制性酶切和去磷酸化后不需要其他纯化步骤。去磷酸化的DNA可直接用于连接反应。
注意：快速DNA去磷酸化和连接试剂盒也包含rAPid碱性磷酸酶，该试剂盒能够快速有效地完成去磷酸化并连接粘性或钝端DNA片段。使用这种方便的试剂盒，在+37 ℃下可在10分钟内对钝端和粘性5′-突出末端进行去磷酸化，并在+15–25 ℃下仅需5分钟即可内完成连接。

根据当前的质量控制程序，对所有批次的rAPid碱性磷酸酶进行测试，确保其不含脱氧核糖核酸酶和切割活性。

一个rAPid碱性磷酸酶活性单位是指在检测条件下，在+ 37℃，1分钟内水解1 mol 4-硝基苯基磷酸酶所需的酶量。

体积活度：1 U/μl

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

组份不可单独销售
rAPid Alkaline Phosphatase Buffer 10x concentrated
rAPid Alkaline Phosphatase 1 U/μl

100

expressed in Pichia pastoris

1 units/μg protein

Roche

37 ℃ optimum reaction temp.

dry ice

−20℃

1个试剂盒包含2个组分

12 - Non Combustible Liquids

WGK 1